Etiketter

Summa sidvisningar

Sidor

Leta i den här bloggen

torsdag 13 november 2008

Inositolin fosfokinaaseista (IPK) IP(5)-2K

Inositolifosfaattien kinaasientsyymeistä (IPKs)

Inositolirenkaan 6 eri hiilen OH- ryhmiin voi liittää fosfaatteja. Fosfaatin liittyminen on kinaasi-entsyymin toimintaa (fosfokinaasi, PK). Tietyt kinaasit voivat asettaa toisenkin fosfaatin samaan hiili-asemaan ja sellaiset molekyylit ovat inositolipyrofosfaatteja (erilaisia IPP-muotoja).

Tässä artikkelissa kerrotaan, että ihmissolun sisällä muodostunut viiden fosfaatin inositoli, penta-cis-fosfaatti IP(5) voi edelleen rikastua ATP:n avulla täydeksi fytiiniksi, IP(6) muotoon, mutta ei ilman entsyymiä IP(5)-2K

Tämä IP5 (2) kinaasi tuottaa IP6- molekyyliä solun sisällä, siis ”animaalisia fytiiniä” voi sanoa. Tämä on sellainen molekyyli, joka voi poistua solusta tarvittaessa fosfaatin vähentämistä.

I(1.3.4.5.6)-P5- (2)kinaasista enemmän:

Inositoli -6-fosfaatin synteesi ja IP-5- (2) kinaasin luonnehdinta.

LÄHDE:

Verbsky JW, Wilson MP, Kisseleva MV, Majerus PW, Wente SR The synthesis of inositol hexakisphosphate. Characterization of human inositol 1,3,4,5,6-pentakisphosphate 2-kinase. Ins-(1.3.4.5.6.)-P5-2-kinaasi. J Biol Chem. 2002 Aug 30;277(35):31857-62. Epub 2002 Jun 25.

Aiemmin tämä IP6- molekyylin ("fytiinin") syntetisoituminen ihmissolun sisällä oli tuntematon seikka. Mutta sienisoluissa toimi inositolirenkaan 2-aseman kinaasi (Ipk1), joka pystyi tekemään hiivassa Ins(6)P fosforylaation, jos vain oli pentafosfaattimuotoa (1,3,4,5,6- pentakisfosfaattia , InsP(5)- lajia) substraattina, mihin sitten liittää puuttuva fosfaatti 2- asemaan spesifisellä entsyymillä. Eri hiivalajeilla oli näitä Ipk1 proteiineja viisi erilaista. Tähän tietoon perustuen identifioitiin ihmisen genomin DNA-sekvenssi kromosomista 9 ja se koodasi ihmiselläkin juuri tuon muotoisen penta-cis-fosfaatin kakkosaseman fosforyloitumista. vastaavalla InsP(5)-2K-kinaasilla.
Rekombinantti ihmisentsyymi tuotettiin ja sillä katalysoitiin IP(6) synteesia siis fytiinihapposynteesiä in vitro, koeputkessa

Tämä valmistettu rekombinanttiproteiini pystyi muuttamaan 31 nmol InsP(5) muotoon InsP(6) minuuttia ja proteiinimilligrammaa kohti. Tässä sanotaan, että Michaelis Menten vakio InsP(5)lle oli 0.4 uMol ja ATP.lle 21 umol.

Jos hiivasolulta Saccharomyces cerevisiae puuttui IPK-1, se ei voinut tuottaa fytiinihappoa InsP(6) ja sellainen tila oli letaali kombinaatio (elinkyvytön) ja siinä oli taustalla geenimutantti, gle1 mutantti alleeli. Sitten osoitettiin että jos tällaiseen ipk1 nolla -hiiva kantaan saatiin ilmenemään ihmisen InsP(5)-2K entsyymi, niin hiivasolussa korjaantui InsP(6) synteesi ja muuten letaalit fenotyypit (gle1-2 ipk1-4) selvisivät hengissä

Kun on tutkittu ihmiskudoksia, on todettu ihmisen InsP(5)-2K-entsyymin mRNA lähinnä ihmisaivojen alueella, sekä sydämessä, istukassa ja testiksessä, siis hyvin tärkeillä alueilla. Kun on saatu eristettyä se geeni, joka on vastuussa nisäkäskehon solun InsP(6) synteesistä, on voitu paremmin alkaa kartoittaa IP6 signalointialuetta. (Nykyäänhän tunnetaan jo IP3 signalointialue oikein hyvin).

13.11.2008 11:02

Inga kommentarer: